狂犬病毒（Rabies virus, RBV）抗體檢測試劑盒用于檢測貓、犬等動(dòng)物血清中的狂犬病毒抗體，用于評(píng)估狂犬病毒疫苗免疫狀況。

本試劑盒采用阻斷ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被狂犬病毒抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有狂犬病毒特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)的抗狂犬病毒單抗，樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合；經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號(hào)與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。

組份

需自備的設(shè)備及試劑

1. 微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶標(biāo)儀。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機(jī)。

樣品制備

取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時(shí)以上。使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。

2. 不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

3. 終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。

4. TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7. 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。

8. 抗原包被板為一次性用品，不得重復(fù)使用；

操作步驟

1. 每次試驗(yàn)均設(shè)置陽性對(duì)照1孔、陰性對(duì)照2孔，陰、陽性對(duì)照不用稀釋，直接取100ul加入反應(yīng)孔。

2. 將樣品稀釋液按90ul/孔加入到微孔反應(yīng)板內(nèi)，之后將待檢樣品血清按10ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻（移液器槍頭請(qǐng)勿混用）；

3. 蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪），置37℃溫育60分鐘。

4. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次，最后在干凈吸水紙上拍干。

5. 每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

6. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌4-6次, 方法同4。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

7. 每孔加顯色液100μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。

8. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定

用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗(yàn)成立的條件是：

陰性對(duì)照（N）OD值>0.5，同時(shí)陽性對(duì)照(P)阻斷率>50%；

計(jì)算方法：

PI (阻斷率)=  1 —（樣品OD值 ÷ 陰性OD均值）

陰陽性判斷：

PI(阻斷率)>40%則判斷為陽性；

PI≤40%則判斷為陰性。

注：（PI=40%相當(dāng)于抗體滴度0.5IU/ml）

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個(gè)月。