介紹

H7亞型禽流感抗體檢測試劑盒檢測家禽、野禽等動(dòng)物血清中的H7亞型禽流感抗體，用于評估禽流感疫苗免疫狀況及感染禽類的血清學(xué)輔助診斷。

本試劑盒采用競爭ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被H7抗原，運(yùn)用抗單克隆抗體與血清中的抗體競爭固相載體中的結(jié)合位點(diǎn)，從而間接檢測血清中的抗H7抗體。在試驗(yàn)中，加入待檢血清及抗單克隆抗體，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有H7病毒特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，從而阻礙了單抗與抗原的結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后，再加入抗小鼠酶標(biāo)二抗，與檢測板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合，再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物顯色，樣本的吸光度值與其所含有的抗體的含量成負(fù)相關(guān)，從而達(dá)到檢測樣品中抗體的目的。

組份

需自備的設(shè)備及試劑

1. 微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶標(biāo)儀。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機(jī)。

樣品制備

取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。

2. 不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

3. 顯色液和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。

4. 顯色液不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7. 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。

操作步驟

1. 取預(yù)包被的檢測板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），待檢驗(yàn)板條每孔均需加入樣本稀釋液40ul，然后將待檢血清10μl加入檢測板，同時(shí)設(shè)陰性2孔和陽性對照1孔，取陰性及陽性對照各10μl分別加入反應(yīng)孔中；

2. 在樣本以及陰陽性對照混勻后，每孔加入50μl單抗工作液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

3. 蓋上封板膜，置37℃溫育60分鐘。

4. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗6次。每次用洗滌液注滿板孔（約250μl），且每次需將洗滌液甩干。洗滌6次后在干凈吸水紙上拍干。

5. 每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

6. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌6次, 方法同4。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

7. 每孔顯色液100ul，蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。

8. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定

用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗(yàn)成立的條件是：

陰性對照（N）OD均值>0.5；

陽性對照（P）OD值/陰性對照（N）OD均值 < 0.4。

計(jì)算方法：

樣品OD值/陰性對照OD均值=S/N值。

陰陽性判斷：

S/N值≥0.35則判斷為陰性；

S/N值<0.35則判斷為陽性。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個(gè)月。